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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:KMML1

  • 產(chǎn)品型號:
  • 產(chǎn)品廠商:乾思生物
  • 產(chǎn)品文檔:
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簡單介紹:
KMML1
詳情介紹:

MML1小鼠肺成纖維細胞產(chǎn)品基本信息

細胞名稱: KMML1細胞, MML1細胞, 小鼠肺成纖維細胞
細胞又名: MML1
種屬來源: 昆明小鼠
組織來源:
細胞形態(tài): 成纖維細胞樣
生長特性: 貼壁生長
培養(yǎng)基: DMEM(內含2mM L-glutamine)+10%胎牛血清(FBS).
生長條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%; 溫度:37 ℃, 
傳代方法: 1:2至1:6,每周2次。
凍存條件: 90% 完全培養(yǎng)基+10% FBS,液氮儲存
支原體檢測: 陰性
應用: 該細胞可以作為轉染宿主細胞。
細胞鑒定:
免疫組化顯示波形蛋白(Vimentin)抗體陰性;結蛋白(Desmin)抗體陽性。

KMML1小鼠肺成纖維細胞接受后處理

1)  收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
 
2)  請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
 
3)  棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
 
4)  如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
 
5)  接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們取得聯(lián)系。
 

KMML1小鼠肺成纖維細胞培養(yǎng)操作

1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。**天換液并 檢查細胞密度。
 
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
 
     1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
 
     2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
     
     3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
 
     4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
 
      1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
 
      2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍存管做好標識。
 
     3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

KMML1小鼠肺成纖維細胞培養(yǎng)注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
 
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問 題,責任由客戶自行承擔。
 
3.   用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶壁脫落,將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結果顯示細胞無活力,請拍下 照片及時和我們聯(lián)系,信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
 
4.   靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng),待細 胞匯合度  80%左右時正常傳代。
 
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基可收集備用,細胞 傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。
 
6.   建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和 Procell 技術 部溝通交流。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián) 系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
 
7. 該細胞僅供科研使用。



MML1小鼠肺成纖維細胞產(chǎn)品說明書pdf版和相關資料下載

MML1小鼠肺成纖維細胞產(chǎn)品應用舉例

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